制備柱常見問題快速診斷與科學(xué)應(yīng)對策略分享

更新時(shí)間：2025-11-24

瀏覽次數(shù)：286

　　色譜柱制備柱作為分離純化的核心載體，長期運(yùn)行中易受樣品污染、操作不當(dāng)或溶劑不兼容等因素影響，出現(xiàn)柱壓異常升高、峰形拖尾/分叉、保留時(shí)間漂移、柱效驟降甚至漏液等問題。若處理不及時(shí)，不僅影響分析準(zhǔn)確性或制備收率，還可能造成昂貴填料報(bào)廢。掌握色譜柱制備柱常見問題快速診斷與科學(xué)應(yīng)對策略，是保障實(shí)驗(yàn)連續(xù)性的關(guān)鍵。

　　問題一：系統(tǒng)壓力異常升高

　　原因：篩板堵塞（顆粒物、沉淀鹽）、柱頭污染、流動(dòng)相黏度過高或流速過快。

　　對策：

　　反向沖洗（僅適用于允許反沖的柱子）：用10–20倍柱體積的強(qiáng)洗脫溶劑（如甲醇/水=9:1）低流速（0.2–0.5mL/min）沖洗；

　　拆下柱前過濾器或保護(hù)柱，檢查是否堵塞并更換；

　　確保樣品經(jīng)0.22μm濾膜過濾，緩沖鹽濃度≤20mM且溶解；

　　制備柱可考慮加裝在線過濾器，防止粗品雜質(zhì)進(jìn)入。

　　問題二：峰形拖尾、分叉或不對稱

　　原因：活性位點(diǎn)暴露（硅羥基未封端）、柱頭塌陷、樣品超載或pH超出柱耐受范圍。

　　對策：

　　對堿性化合物，添加三乙胺等競爭性堿抑制硅羥基作用；

　　檢查是否使用過高pH（>8）導(dǎo)致硅膠溶解，改用耐高pH柱（如雜化顆粒）；

　　降低進(jìn)樣量或稀釋樣品，避免超載；

　　若柱頭已塌陷（可見凹陷），可嘗試切除0.5–1cm柱頭（僅限制備柱），但會(huì)縮短壽命。

　　問題三：保留時(shí)間漂移或重復(fù)性差

　　原因：柱未充分平衡、溫度波動(dòng)、流動(dòng)相比例不準(zhǔn)或固定相流失。

　　對策：

　　每次更換流動(dòng)相后，用10–15倍柱體積沖洗至基線穩(wěn)定；

　　使用柱溫箱控溫（±0.1℃），避免室溫波動(dòng)影響；

　　校準(zhǔn)泵比例閥與混合器，確保梯度準(zhǔn)確；

　　若C18柱在高水相下出現(xiàn)“相塌陷”，可先用高有機(jī)相活化再平衡。

　　問題四：柱效（理論塔板數(shù)）顯著下降

　　原因：填料污染、床層干裂、機(jī)械震動(dòng)導(dǎo)致溝流。

　　對策：

　　執(zhí)行深度清洗程序（如先水→甲醇→異丙醇→二氯甲烷→甲醇梯度沖洗）；

　　避免柱子在無溶劑狀態(tài)下暴露空氣，尤其制備柱停機(jī)時(shí)務(wù)必充滿保存液；

　　運(yùn)輸或移動(dòng)時(shí)用堵頭密封，并水平放置防沉降。